猫头鹰属於夜行性猛禽，一到夜晚就会开始外出活动，更有较大型之猫头鹰亦会捕食鸟类，而白天视力变差，则躲藏在树上或树洞较少活动。
猫头鹰是典型的夜行性鸟类。它的视觉神经非常敏感，白天的紫外线会对它的眼睛造成伤害，并且猫头鹰的生理结构已经发展成适合晚上捕猎的了。猫头鹰的眼球呈管状，视网膜上有极其丰富的杆状细胞。视细胞有两种，即杆状细胞和椎状细胞。杆状细胞负责弱光下视物，而椎状细胞负责强光时视物。杆状细胞对颜色的分辨力弱，椎状细胞对颜色的分辨力强。猫头鹰的眼睛里都是杆状细胞，基本不含椎状细胞，所以在白天强光的情况下，它无法正常视物，而到了晚上它的视力要比人好。